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Verfasst am: 14.10.2004, 14:08 Titel: trippe-Versuch Gruppe III

Hier die Pipettierschemata für die verschiedenen Puffer:

Maleinsäurepuffer: 30 ml 5 M NaCl-Lsg., 750 ml H20 und 11,6 g Maleinsäure wurden vermischt und mit 1 N NaOH auf pH = 7,5 gebracht. Das ganze wurde mit Wasser auf ein Volumen von einem Liter aufgefüllt.

Waschpuffer: 1,8 ml Tween 20 wurden zu 600 ml Maleinsäurepuffer gegeben und vermischt. Die Doppelte Menge wurde angesetzt, damit der Puffer für alle Gruppen reicht.

Blockierungslösung: 1,5 g Blockierungsreagenz wurden mit 150 ml H20 aufgefüllt und gemischt. Davon wurden 130 ml bei der Durchführung verwendet und 20 ml für die nächste Lösung abgespalten.

Antikörperlösung: 2 µl Antikörper und 20 Blockierungslösung wurden vermischt.

Detektionspuffer: 20 ml Tris/HCl (1M) und 4 ml NaCl-Lsg (5M) wurden mit NaOH auf pH = 9,5 gebracht und mit H20 auf 200 ml aufgefüllt.

Verdünnte CSPD-Lsg: 1 ml Detektionspuffer wurde mit 10 µl CSPD-Lsg vermischt.

Außerdem noch wichtig: Die Bilder zum Versuch In vitro Transkription befinden sich hier --> http://www.ruhr-uni-bochum.de/receptor-bioch/

da geht ihr auf intranet und müßt euch einloggen. falls ihr name und pw nicht wißt, fragt mich danach, denke nämlich, dass ich das hier nicht öffentlich reinstellen darf...
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Wenn jemand ein Problem erkannt hat und nichts zu seiner Lösung beitragen kann, ist er selbst Teil des Problems

Verfasst am: 14.10.2004, 14:08 Titel: Anzeige

Verfasst am: 23.10.2004, 18:19 Titel: Frage zur Durchführung

Jutn´Tach!
Der Trippe legt doch immer so viel Wert auf Durchführung, sprich, man muss die ganzen Arbeitsschritte aufdröseln.
Ich war leider die meiste Zeit des Versuchs nicht anwesend, schreibe aber Protokoll (taktisch unklug..).
Daher die Frage:

Wie genau wurden die Nylonmembranen denaturiert und renaturiert?
Glaube, das war irgendwas mit 95Grad im Wasserbad 30min und dann bei RT 15min, oder?
Vielleicht hat ja auch jemand Lust, mir mal seine Durchführung zu schicken (*abschnorr) - nur zur Orientierung...
THX!
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Verfasst am: 23.10.2004, 18:30 Titel:

jutn tach zurück Winken

,

habe das protokoll im download-center abgelegt. kannst es dir da runterladen.
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Verfasst am: 23.10.2004, 18:54 Titel:

Super,Weltklasse!
Das mit dem Hitzedenaturieren war ja ganz schöner Schwachsinn - Stimmt, wir haben das ja mit NaOH, gemacht...
Jetzt komm ich jedenfalls klar - danke!
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trippe-Versuch Gruppe III